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細胞活力檢測

更新時間:2024-09-26

簡要描述:

細胞活力檢測
tunel細胞凋亡檢測服務(wù)利用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯(lián)物標記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實驗方案,檢測方便,且適用于熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀。熒光信號易于被檢測(Ex/Em = 555nm/565 nm)。

  MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,化學(xué)名稱: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍。是一種黃顏色的染料。MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。

  細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3‘-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3’-末端,從而可進行凋亡細胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3'-OH形成,很少能夠被染色。所以通過TUNEL法,即基因片段末端標記(Fragment End Labeling, FragEL)從而可進行凋亡細胞的檢測。
  TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒 (橙紅熒光) 利用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯(lián)物標記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實驗方案,檢測方便,且適用于熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀。熒光信號易于被檢測(Ex/Em = 555nm/565 nm)。
  細胞活力檢測操作步驟
  1.收集對數(shù)期細胞,調(diào)整細胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調(diào)密度1000- 10000 /孔。
  2.一定條件培養(yǎng)細胞適當(dāng)時間,至細胞單層鋪滿96孔平底板,加入濃度梯度的藥物。
  3.適當(dāng)條件培養(yǎng)適當(dāng)時間,倒置顯微鏡下觀察。
  4.每孔加入10ul MTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)1-4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng),可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液。
  5.終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
  6.每孔加入100ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
  活力計算:
  細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100
  A(加藥):具有細胞、MTT溶液和藥物溶液的孔的吸光度
  A(空白):具有培養(yǎng)基和MTT溶液而沒有細胞的孔的吸光度
  A(0加藥):具有細胞、MTT溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
  細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
  tunel細胞凋亡檢測服務(wù)應(yīng)用范圍
  1.抗腫瘤藥物篩選
  2.細胞毒性試驗
  3.腫瘤放射敏感性測定
  細胞活力檢測服務(wù)期限
  1-2周。


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